Об оценках Т-34

О танке Т-34 написаны сотни книг, воспоминаний, научных трудов и различных статей. На эту тему давно высказались те, кто создавал эти боевые машины, воевал на них, обеспечивал их эксплуатацию и ремонт во фронтовых условиях и в тылу, готовил кадры, а равно и те, кто воевал против них или, с другой стороны, был нашим союзником и давал им характеристику со своей точки зрения. Не остались в стороне многочисленные историки и журналисты, пишущие на военно-техническую тематику. Одним словом, об этом танке, как говорится, «не писал только ленивый».

Как правило, боевые машины пытаются сравнивать, учитывая их основные тактикотехнические характеристики (ТТХ) и такие боевые качества, как мобильность, огневая мощь и броневая защита. Конечно, при определении «лучшего» танка (а это почти всегда сугубо субъективная оценка) многие оперировали и другими показателями. Например, возможностью серийного производства и массированного применения, эксплуатационностью, ремонтопригодностью, боевой эффективностью, надежностью, качеством изготовления и т. д.

Танки того периода классифицировались по величине боевой массы - легкие, средние, тяжелые. И сравнения могли проводиться среди танков одной категории, например, «лучший средний танк» или «лучший тяжелый танк». Однако часто бывает довольно сложно сопоставлять отдельные боевые качества.

Например, огневая мощь включает в себя калибр основного вооружения, его могущество, скорострельность, приборы наблюдения и прицеливания, маневр огнем и т. п. Понятие маневренности включает мощность двигателя, максимальную и среднюю скорости движения, возможности по преодолению препятствий, запас хода, удельное давление на грунт и проходимость. Сюда же входит рассмотрение силовой установки танка, его трансмиссии, гусеничного движителя, удобство управления и т. д.

Так что при оценке танков и составлении различных «рейтингов» легко ошибиться и прийти зачастую к парадоксальным выводам.

Тем не менее, подавляющее большинство экспертов, изучающих танки периода Второй мировой войны, отдают предпочтение именно Т-34, приводя в подтверждение своих выводов, в том числе - мнения противника (генерал- майор В.Ф. фон Меллентин, генерал-полковник Г. Гудериан, генерал-фельдмаршал Э. Клейст), а также наших союзников по антигитлеровской коалиции (британский премьер-министр Уинстон Черчилль, британский историк и военный теоретик Б.Г. Лиделл Гарт, специалисты Абердинского полигона в США).

Однако среди историков и журналистов немало и тех, кто активно критикует «тридцатьчетверку» и отдает первенство немецким танкам или американскому М4 «Шерман». И они также приводят в качестве аргументом выводы как наших противников, так и союзников.

То есть общих «узаконенных» критериев оценки боевых машин не существует. И зачастую все зависит от пристрастий авторов, а они тоже могут меняться и часто зависят от конъюнктуры исторического момента.

Как офицеру-танкисту, непосредственно занимавшемуся эксплуатацией Т-34, мне видится, что для сравнительной оценки танков периода Второй мировой войны нужно исходить из роли танка в выполнении той военной (оборонной) доктрины, которой придерживалась страна и в предвоенные годы, и в годы войны. Основные положения военной доктрины складывались и изменялись в зависимости от политики, уровня развития производительных сил, угрозы со стороны вероятного противника и т. п. В соответствии с основными положениями военной доктрины велось военное строительство в разных странах и формировалась стратегия ведения войны.

Основа нашей военной доктрины в предвоенные годы - кратковременная оборона, да и то наступательного характера, до полного развертывания тактических и стратегических резервов, после чего начиналась наступательная война на чужой территории с массированным применением танков во всех видах боя (прорыв обороны противника, стремительное продвижение для захвата территории врага, окружение вражеских войск, уничтожение резервов противника, его опорных баз, штабов, разрушение коммуникаций) до полного разгрома врага и его безоговорочной капитуляции.

Это, в свою очередь, потребовало организации массового производства танков, хотя в стране крайне остро ощущался дефицит высококвалифицированных рабочих и ИТР, хорошо подготовленных танкистов, средств эксплуатации и ремонта. Все это отразилось и на тактико-технических требованиях к разрабатываемому в конце 1930-х гг. танку Т-34.

Конечно, в ходе Великой Отечественной войны (по результатам ее начального периода, когда немцы оказались под Ленинградом и Москвой) военная доктрина и ее «танковая» составляющая были уточнены: танк Т-34 вместо 76-мм пушки стал с 1944 г. выпускаться с 85-мм пушкой (Т-34-85), с увеличенным экипажем; выросло его процентное соотношение в танковых войсках и общее количество машин, а также в разы увеличилось количество самоходных артиллерийских установок (САУ), предназначенных для борьбы с танками противника. Причем САУ в основном были на базе все той же «тридцатьчетверки».

То есть в условиях войны наша военная доктрина принципиально не менялась, и ее положениям идеально соответствовал именно средний танк Т-34.

В Германии также была разработана своя военная доктрина. Ее основу составляла стратегия так называемой «молниеносной войны», которая должна была обеспечить разгром любого противника еще до того, как он окажется способен в полной мере развернуть свой военно-экономический потенциал. Таким образом, официальной военной доктриной Германии в предвоенные годы стала «тотальная и молниеносная война» с массированным применением танков. Большое внимание при этом уделялось подготовке танкистов. Массовое серийное производство танков обеспечивали общий высокий уровень германской промышленности, высококвалифицированные рабочие и ИТР.

Следуя принятым положениям, немцы начали Вторую мировую войну даже без тяжелого танка, только с легкими и средними машинами. При этом на первом этапе им сопутствовал успех. Только после поражения под Москвой стало ясно, что «блицкриг» провалился. Пришлось серьезно пересматривать военную доктрину. Для Германии началась долгая и изнурительная война, к которой она оказалась совершенно не готова.

В ходе войны пришлось перестраивать «танковую» составляющую немецких войск. Так, танк Pz.IV получил длинноствольную пушку, его броневая защита увеличилась почти вдвое. На вооружение начали поступать тяжелые танки «Пантера» и «Тигр», а также различные самоходные установки. Основная задача подавляющего большинства из них заключалась в борьбе с советскими танками, в основном-с Т-34.

Однако промышленность Германии так и не смогла противостоять советскому танкопрому. Количество выпускаемых боевых машин резко упало, а их качество заметно снизилось. Финал известен - полное поражение Германии.

В «Кратком техническом описании танка», изданном в 1943 г., говорится: «Танк Т-34 предназначен для уничтожения живой силы противника, его артиллерии, различных огневых точек, транспортных средств и танков». Как видим, танки противника - далеко не единственная цель, подлежащая уничтожению, да и стоит не на первом месте. Исходя из этого и составлялся боекомплект Т-34, включавший осколочно-фугасные и бронебойные выстрелы. А для борьбы с танками противника служили другие эффективные средства - штурмовая авиация, противотанковая артиллерия, САУ, мины и т. д. У нас, особенно в начальный период войны, широко и довольно эффективно применялись противотанковые ружья и бутылки с зажигательной смесью.

Р Г Б ОД

Ставропольская государственная сельскохозяйственная академия

На правах рукописи

в;шыяков Геннадий викторобич

ОЦЕНКА Т- и Ъ- СИСТЕМ ИММУНИТЕТА ПРИ ПСОРОПТОЗЕ ОВЕЦ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬШ С НИМ

диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

|>„"авропаль - 1994

Работа выполнена в Ставропольской научно-исследовате.гьской ветеринарной станции /НИВС/, овцеводчес:шх хозяйствах Ставропольского:фая и во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарном энтомологии и драхнсчогии.

Научные руководители: доктор ветеринарах наук, профессор, член-кор.РАС.ХН В.3.Филиппов

доктор ветеринарных наук, профессор А.А.Всдянов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор А.у Дмитриев

доктор биологических наук, профессор И.М.Ганиев

Ведущая организация - Московская ветеринарная

академия имени К.И.Скрябина

¡Зуцита состоится " £ " 1994 г. в "/О" т:асов

ни заседании специализированного совета К-120.53.01 _ Ставропольской государственной сельскохозяйственной"академии.

Адрес: 355014, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический., 10.

С диссертацией мсжно ознакомиться в библиотеке Ставропольской

государственной сельскохозяйственны! академии.

Ученый секретарь -

специализированного совета кЭО"ЬС^ А.^.Боголюбова

1. ОБ.:!АЯ МРАТГШ1СТИКА РАБОТЫ

Несмотря на проведение широкого ряда мероприятий по ликвидации псороптоза овец в Ставропольском крае, в отдельных районах региона это заболевание продолжает регистрироваться довольно часто. От пер;.болевэн;тя псороптозом каждая овца теряет в среднем 25,5$ ш^сти и 10,952 живой массы /Башкатов Г.А., 1970/.

Литературные данные последних лет так же свидетельствуют, чго в ряде республик, краев и областей нашей страны, псороптоз овец имеет еще значительное распространение /П.С.Страна;!,кин,1983", А.А.Водянов, 1984; Б.В.Авдричук, Л.Ф.Юрицин, 1986; С.Н.Никольский, 1991 и др./. В нодэй стране и за рубежом накоплен огромный фактический материал, связанный с этим заболеванием, разработан ряд мероприятий по борьбе с ним. Однако, потери в овцеводстве от псороптоза продолжают оставаться высокими и складываются из снижения привесов, настрига шерсти и ухудшения ее качества, затрат на проведение мероприятий по ликвидации илвазии, дополнительного расхода кормов на восстановление упитанности овец после" перенесенного заболевания и их отхода /Р.М.Каплан, А.А.Яков--:ев, В.В.Терещенко, 1973/.

В последние десятилетия в борьбе с псороптозом овец применяют главным образом хлор-, фосфорорганические и карбаматные препараты. Многие из них не отвечают современным требованиям ввиду их Рвдостаточной эффективности, высокой токсичности для животных и человека, способности накапливаться и длительно сохраняться во внешней среде, организме животных и, по всей вероятности, они снижают резистентность организма животных. Кроне кого, установлено, что у многих видов членистоногих /клещи,мухи,вши, тараканы, клепы/ наблюдается резистентность ко многим широко применяемым ицгсктоат<арицидам различной химичзской природы /М.А.Палимпсестов, 1959; Е.А.Чалдык,1977б:Б.$1о*г.,197а;

1976;3&.Wcl , 1978; L.P.lavv$tw,f\."P.S\04.w>. . 1980/. Поэтому, одной из важных задач в ветеринарной акарологии язляется изыскание высокоэффективных препаратов против клещей - возбудителей поороптоза овец и менее токсических для теплокровных. Расширение-ассортимента акарицидов.позволит чередовать их.применение» что предотвратит развитие резистентности у клещей.

Немаловажную роль в разработке мер борьбы с псороптозом овец, на наш взгляд, доджно быть отведено изучешз> их иммунного статуса. К сожалению, данных по иммунобиологической реактивности организма животных при этом заболевании мы не нашли в доступней литературе.

1.2. Пель и задачи исследований. Основная цель.работы. - изыскание высокоэффективных средств терапии, профилактики и изучение иммунобиологической реактивности организма овец при псороптозе.

Для выполнения поставленной цели перед нами были поставлены следующие задачи:

Изучить распространение псороптоза овец в Ставропольском крае; г изучить особенности развития иммунитета;

Дать оценку Т- В- системам иммунитета;

Изучить юшетику -Т- и В- лимфоцитов, характер изменений качественных показателей Т- системы на"субпопуляционном уровне, доследовать состояние функциональной активности эозинофилов, макрофагов и нейтрофилои крови у овец;

Изучить терапевтическую и профилактическую эффективность новых акарицвдных препаратов в лабораторных и производственных условиях.

1.3. Научная лоьизна.

Впервые дана оценка Т- и В- системам иммунитета при псороптозе овец и показаны особенности развития иммунитета, обусловленные морфологической характеристикой клещей Tsoi optes ovii

~ Выявлена акарицидная активность новнх препаратов, входящих в группу химически модифицированных соединений биологической природы, известных как "авермектины", и лх пролонгированных форм.

1.4. Практическая ценнооть работы.

Данные.полученные при изучении акарицидной эффективности указанных препаратов, послужили основой их применения в борьбе с псо-рептозом овец и вошли во "Временное наставление со применению био-

логического акарицида саркопцидина для лечения сельскохозяйственных животных и пушных зверей при саркоптоидозах" /утверждено ГУБ МСХ СССР 22.10.90./ и "Временное наставление по применению аверсекта при псороптозе овец ж крупного рогатого скота." /утверждено ГУБ MCI РФ 11.12.92./

Препараты саркопцидин и пролонгированные формы ивомека /клеевая и ИП-1/ рекомендованы для широких производственных испытаний.

Результаты оценки Т- и В- систем иммунитета при пссроптозе овец Moiyv быть использованы для разработки иммунокоррегирувщей терапии и в учебных программах ветеринарных вузов, факультетов и техникумов.

1.5. Апробация ":°зультатов. Материалы диссертации доложены на научной конференции СХИ /Ставрополь, 1993/, Ученых созетах Ставропольской НИВС /Ставрополь, 1991-1993/, на заседаниях Ученого совета ВНИИВЗА /Тюмень, 1991-1993/.

1.7. Объем у структура диссертации. Диссертация изложена на 131 страницах м?шноплсного текста. Текст иллюстрирован 29 таблицами, 10 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и списка использованной литературы /198 источников, в том числе 66 зарубежных/.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЬЩОВАНКп

В основу работы положены результаты экспериментов, проведен^ них на 203 экспериментально и спонтанно зараженных накожшковы-"ли клещами овцах разных половозрастных групп. Производственные опыты проведены а? 1515 овцах различных пород.

Изучение распространения псороптоза овец проводили по данным отчетов районных ветеринарных станций к результатам клинического т. акарологичрекого обследования жчеотных в хозяйствах. .

Природно-климатическая, хозяйственная характеристика края и распространение псороптоза описаны на основании систем ведения сельского хозяйства Ставропольского края /А.А.Никонов и др., 1980/ и дайных ветеринарной отчетности.

Иммунобиологическую реактивность овец при экспериментальном

псороптозе изучали на 20 овцах кавказской породы.- Оценку иммунного статуса проводили по следующим методикам:

Оценку Т- системы иммунитета в реакции спонтанного розеткообразо-вания по методу И.Золс1о(.1/198.1/;

Определение теофиллинрезистентных и теофшшш чувствительных Т-ялеток по методу ¿.итаИЬиЛ я1.«1,/1978/ ;

Оценку В- системы иммунитета по методу £.\Леу\<и»,/1973/;

Количество лейкоцитов и лейкоцитарный профиль определяли по общепринятой методике.

Изучение эффективности новых акарицидов при псороптозе овец проводили в лабораторных и производственных условиях в осенне-зимние периоды, используя "Методические указания по первичном? отбору новых.акарицидов и сравнительному изучению их активности против саркоптовдных клещей" /П., ВА.СХНЖ, 1982/.

В чиле изучаемых нами, препаратов были: саркопцидин, клеевая и пролонгированные формы ивомека, ивомек-пурон, аьерсект, лрепараты-ИК-1, ИК-2, ИК-3, ИП-1.И-1, И-2 и й 41. Дозы, методы и кратность* их применения указаны в соответствующих разделах автореферата.

Материалы исследований обработаны по методу Стьвдента /В.Ю. Урбах, 1963/.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Природно-климатическая-и хозяйственная характеристика Ставропольского края

В крае ввделено пять сельскохозяйственных зон,"характеризующихся особенностями климата-, почв, рельефа и структуры земельных угодий, преобладающими типами сельскохозяйственных предприятий, набором возделываемых культур и отраслей: первая - овцеводческая /крайне засушливая/, вторая - зерново-овцеводческая /засушивая/," третья - зерново-скотоводческая /неустойчивого увлажнения/, четвертая - прикурортная зона /достаточного^увлажнения/, пятая зона.- горного скотоводства /избыточного увлажнения/.

Таким образом, для. края характерно многообразие природно-климатических условий от полупустынь на северо-востоке и вечными снегами на юго-западе, которое обуславливает эпизоотическую ситуацию указанных зон по псороптозу овец.

2.2.2. Распространение псороптозе овец в Ставропольском крае

С целью изучения распространения псороптоза овец в 1501-1932 гг было проведено обследование отдельных хозяйств Ставропольского края.

Полученные данные свидетельствуют, что псороптоз ежегодно регистрируется во всех климатических зонах и составляет"от 11 до 25$ общего поголовья; наибольшее распространение болезни отмечается в 3 зоне. В некоторых хозяйствах в отдельные годы пораженность овец накожниковой чесоткой достигала 50?? и более.

Заболевание наносит значительный экономический ущерб овцеводству за счет резкого снижения настрига и качества шерсти, уменьшения живой массы. Распространение псороптоза, как покарали наши исследования, связано с рядом причин, в частности: дефицитом противопсороп-тозных средств, в результате чего не проводится обработка отар, подозреваемых в заражении и не обрабатываются овцы индивидуального сектора; не проводится или проводится некачественно дезакаризация кошар и выгулов; часть овец неблагополучных отар /хурда/, в силу истощения и сопутствующих болезней не подвергается обработке, оставаясь источником инвазии; безнадзорный ввод в общественные отары овец индивидуального пользования, сомнительного по псороптоэу ола-гополучия; не соблюдаются методики обработки овец в Еаннах и регламент использования кусочной эмульсии.

2.2.3. Специфика возбудителя псороптоза овец, определяющая особенности течения иммунологических процессов

В отличие от возбудителей^инфекционных болезней у клещей имеется ряд существенных особенностей в биологии и физиологии. Самым показательным отличием являются большие размеры клещзй со сложной морфологической организацией»

у клещей- пищеварительная и экскреторная системы, продукты выделения которых могут оказывать на организм овец как токсическое, так и антигенное воздействие.

Принципиальные отличия возбудителя псороптоза и инфекционных болезней в типе размножения и физиологии. Клещи развиваются стадий-

но /яйи.о-личинка-прстонимфа-телеоним| а-имаго/ с длительным биологическим циклом и только на кожных покровах» Каждой стадии клеща должен быть присущ и свой антиген. Бактерии, грибки, вирусы и в большинстве простейшие воздействуют на организм хозяина своими корпускулярными антигенами; клещи же могут влиять на него и продуктами своего распада - соматическими антигенами. В большинстве же случаев они воздействуют на организм только своими метаболитами и секретами. Избирательная локализация клещей обусловлена местом, где они находят наиболее благоприятные условия для своего развития и существования.

Выживаемость клещей-накожников /наряду с условиями окружающей среды - температуры, влажности/ в немалой степени зависит от возрастных, физиологических, индивидуальных особенностей организма хозяев, юс иммунобиологической реактивности.

Учитывая изложенное, мы попытались расшифровать механизм иммунитета при псороптозе овец, дав оценку главному из его звеньев -Т- и В- системам иммунитета. . " "

2".2.4. Оценка Т- и В- систем иммунитета

Для изучения иммунобиологической реактивности организма овец прр экспериментальном псороптозе было проведено два опыта. В них участвовало по 10 одногодичных валушков кавказской породы, которых разделили на две группы: подопытную /5 толов/ и контрольную /5голов/. Для исключения.возможного перезаражения животных содержали в отдельных боксах.

Животным первой группы подсаживали по 10 имаго накожниковых клещей с интервалом "в три дня. Овцы второй группы служили контролем. Для определения иммунного статуса брали кровь до заражения, а затем на о, 10, 15, 20, 30,40 дни с начала первой подсадки, и в течение 50 дней за животными вели клинические наблюдения. Опыт первый описан в разделах 2.2.4.1. - 2.2.4.6., опыт второй - 2.2.4.7. - 2.2.4.12

2.2.4.1. Клинические наблюдения

Первые клинические признаки псороптоза отмечали у овец на 10-й день.после первого заражения. В местах подсадки клещей /область плеча/шерсть была спутана, штапель грязный., животные проявляли легкое беспокойство. На 15 сутки: в местах подсадки клещей шерсть спутана, грязная, кивотше. проявляли легкое почесывание; на коже в области плеча мокнущие очаяки с наличием желтоватого Еыпота; температура тела была повышена у всех подопытных овец на 0,8 -1,0°С. На 20 сутки наблюдали выраженный псороптозный процесс: животные прояв-

ляли беспокойство, при исследовании соскобов у всех были■обнаружены клещи о".мз температура тела повышена на 1,0 - 1",1°С.

На 30 день после первой подсадки клещей все животные были больны псороптозом, г. соскобах находили клещей накожников во всех фазах развития. Температура тела была повышена на 0,5 -0,7°С. У контрольных животных отклонений от нормы не "отмечали.

На 40 день животные отказывались от корма, в местах поражения /область плеча/ видны "забои", шерсть спутана, выбита,- животные терлись о твердые предметы, доставали пораженные участки кожи зубами и били задними конечностями. Температура тела 40,0 - 40,7°С. Акаролог.отеское исследование соскобов показало наличие наксжнико-В11х клещей во всех фазах развития.

У контрольных животных в вышеуказанные сроки обследования отклонений в клиническом статусе не отмечали.

2.2.4.2. Кинетика общего количества лейкоцитов

На 5 сутки после заражения овец установлена тендзнция увеличения з крови количества лейкоцитов о 7,5^1,2 до 9,61-0,8 тыс/мкл, на 10 сутки- до 9,11*1,3 тыс/мкл, а на 15 день исследования количество лейкоцитов у подопытных и контрольных животных снизилось до 4,32*0,2 тыс/мкл.

Через 20 дней у подопытных животных количество лейкоцитов увеличило-^ до 8,956*0,5 тыс/мкл, а на 30 сутки - до 9,575*0,8 тыс/мкл. Однако пик лейкоцитоза приходился у животных этой группы на"40 день до 11,90*0,39 тыс/мкл против 8,52*0,9 тыс/мкл в контроле.

Значительные изменения отмечены нац^ и при изучении лейкофор-мулы крови у подопытных животных по сравнении с контролем. У животных наблюдали эдзинофчлию, которая была наиболее выражена к концу опыта. На протяжении всего периода исследований отмечалось незначительное увеличение количества нейтрофилов.".

2.2.4.3. Кинртика абсолютного количества Т- лимфоцитов

В течение первых 15 дней мы наблюдали снижение Т- лимфоцитов с 2580*29,4 до 1330*21,2 Е-Р*Ж/мкл с последующим подъемом на 30 день до 5922^57,3 Е-РОК/мкл, однако на 40 день количество Е-РОК снизилось и было ьыше, чем-у животных контрольной группы. Следует отметить, что в ходе исследований существенных изменений качественных показателей Ь-РОК у контрольных овец мы не.отмечали, и они соста&дяхи от 138Э±26,0 до 3520-10,2 Е-РОК/мкл. »

2.2.4.4. Кинетика тесфиллинчувствительных и теофиллинрезистснтных Т~ лимфоцитов

Через 5 дней о начала ошта установлено снижение количества Тфр-РОК/мкл при незначительном увеличении Тфч-РОК.

Изучение способности Тт лтафоцитов" к розетаообразованию в, присутствии теофиллина, проведенное на 10-15 дни с начала опыта, показало, что в эти дни достоверно снижалось как количество Тфр-РОК, так и-количество Тфч-РОК. Однако, с 20 дня наблюдаюсь резкое увеличение Тфр-РОК у животных подопытной и контрольной 1рупп. Изучение розеткообразующей способности Тфч-РОК в крови овец на 40 день с начала эксперимента позволяет говорить о количественном-взлете числа теофиллинчувствительных Т- лимфоцитов у опытных животных с одновременным снижением Щ>р-Р0К /2137*268,"3 Тфч-РОК - 2320*110,2 Тфр-РОК/ против 2266^532,3 Тфр-РОК - 846*378,7 Тфч-РОК в контроле.

При изучении иммунобиологической реактивности овец в опыте определяли индексные показатели: соотношение числа теофиллинрезис-тентных Т- лимфоцитов к теофиллинчувствительным Т- лимфоцитам. Индексные показатели снижались у подопытных животных на 5, 10, 30 и 40 дни исследований. Предел доверительного интервала, отражающий сбалансированность Т- клеточной система, приходился только на 5-10 дни после заражения.

2.2.4.5. Кинетика абсолютного количества В- лимфоцитов

ири изучении функциональной активности В-лимфоцитов в реакции розеткообразования установлено, что на 5 день после заражения:ки-вотных количество ЕАС-Р0К резко увеличелось до х276^25,8 ЕАС-РОК/мкл против 708-27,4 ЕАС-РОК/мкл в контроле. В последующие дни исследований констатировали снижение В-лзш|оцитов до 96±22,6 ЕАС-РО^мкл. При исследовании крови на.-20 день с начала опыта установлено достоверно, по сравнению-с контролем /1-221^10,4 ЕАС-РОК/жп/, повышение ЕАС-Р0К в крови подопытных животных. Последугщее изучение розеткообразующей способности В-лимфоцитов у опытных животных выявило статистически значимые изменения количества ЕАС-Р0К как у подопытных, так и контрольных овец, которые выражались в снижении их количества.

2.2.4.6. Результаты акарологических исследований

На 10 день исследований у 4-х овец из пяти мы находили живых накожниковых клещей, а начиная с 15 дня у всех подопытных животных были обнаружены клещи, причем их количество в течение всего ошта

шстоянно увеличивалось.

Таким образом, результаты проведенных нами исследований показали, что заражение овец клещами ovi<3 вызывает изменения в их иммунном статусе. Угнетение Т~зависимого иммунного ответа и неспецифической активности Т-лимфоцитов свидетельствует об угнетающем воздействии клещей на Т-систему иммунитета хозяина. Полученные данные подтверждается и повышением сулрессорпой активности Т-лим-фоцитов.

Исследования по изучению индекса иммунорэгуляции показали, что заражение животных накожндковыми клещами сопровождается изменением ИИ, указывающего на дисбаланс в системе Т-лтфоцитов.

В связи с тем, что до наших исследований отсутствовали какие-либо сведения о воздействии накожниковых клещей на иммунную систему овец, было решено полученные нами данные /1992г./ перепроверить путем повторного проведения исследований в аналогичном эксперименте 1993 г. /2.2.4.7. - 2.2.4.12./.

2.2.4.7. Клинические наблюдения. Изменения в ^клиническом статусе подопытных и контрольных ОЕец аналогичны первому опыту.

2.2.4.8. Кинетика общего количества лейкоцитов. Анализ подсчета количества лейкоцитов в крови овец подопытной группы показал до- . стоверное, по отношению к контролю, увеличение их количества уже

на 5 день поело первого заражения до 8260*6,60 тыс/мкл, с последующие повышением лейкоцитов до 9330^30,1 тыс/мкл на 10 день. "У кдвот-"шх коктроланой группы количество лейкоцитов в эти дни составляло 6690*83,2 - 5ЭС0*13",3 тыс/мкл. Следует отметить, что лейкоцитоз у подопытных животных был на протяжении всего периода исследований и лишь к 40 дню мы регистрировали снижение общего количества лейкоцитов до 7370*51,7 тыс/мкл, однако оно было выше, чем у контрольных животных.

При изучении лейкоцитарной формулы крови овец подопытной и контрольной групп обращает на себя внимание эозинофилия: уже на 5 день мы отмечапи повышение эозинофилов до 3,3*1,0$ против 2,5*1,0 в контроле. Повышенное количество эозинофилов констатировали на 10 и 15 дни исследования до 4,0*0,8? против 1,2*0,2 - 1,0*0,7$ в контроле.

Проведенный до начала исследований подсчет нейтрофилов и моноцитов не выявил статистически значимой разници у жигзтных подопытной. и контрольной групп.

Полученные результаты подтверждают, что экспериментальное заражение животных клещами Ts. ovls вызывает изменения в лейкоформуле /эозинофилию/.

2.2.4.9. Кинетика абсолютного количества Т-лимфоцитов. Полученные данные в отношении Т-снстеш иммунитета и динамики Т-клеток при псороптозе свидетельствуют об активация и угнетении Т-клеточного звена на разных стадиях развития болезни. Так, на 5. сутки с начала эксперимента нами зарегистрировано незначительное увеличение Е-РОК до 2880*17,2 ¿-РОК/мкл. Однако, уже на 10 день количество Т-лимфо-цитов увеличилось в 1,6 раза, что выражалось в количественном отношении в 4210*77,2 Е-РОК/мкл против 2061*36,7 Е-РОК/мкл в контроле.

Последующее изучений розеткообразукщей способности -Т-лимфоцитов крови подопытных животных выявили статистически значимее увеличение Т-лимфоцитов до 2959*39,7 Е-РОК/мкл, которое было зарегистрировано нами на 30 день с начала эксперимента, и снижение их количества на 40 сутки.

2.2.4.10. Кинетика теофиллкпчувствитольных и тбофиллинрезистен» тных Т-лимфоцитов. Через 5 суток с начала опыта установлено снижение Тфр-РОК в крови подопытных овец до 522-11,2 Тфр-РОК/мкл, при одновременном резком увеличении 1фч-Р0К у этих же животных; на 15 и 30 дни

с начала опыта до 3779±10,6- 2363*26,1 Тфр РОКАисл, пру контрольном уровне 2254±26,5-1594^31,2!фр -РОК/мкл, с незначительным снижением их количества на 20 и 40"дни.

2.2.4.11. Кинетика абсолютного количества Б-лимфоцитов. в крови овец через 5 суток после заражения выявлено снижение количества В-ли-мфоцитов до 506±63,0 ВАС-РОК/мкл. Однако, уже на 10 день мы отмечали резкое увеличение количественных показателей, рецепторной активности В~лим£оцитоь до 965*21,5 ЕАС-РОК/мкл; у контрсльных"животных их было 578*88,0 ЕАС-РОК/мкл.

Изучение функциональной активности Б-лим|оцитоь в реакции розет-кообразования показало дальнейший подъем В-лимфоцитов вплоть до 30 дня после первого заражения со снижением к концу исследований.

2.2.4.12. Результаты акарологических исследований. Живых клещей Рэ.мы находили /на 10 день/ после первой подсадки у о животных из 5, а на 15 и в последующем до 40 дня их количество увеличивалось.

Таким образом, прг. заражении животных какожниксвыми клещами, в начале болезни идет увеличение ка.к Т-, так и В-лимфоцитов, которое" затем сменяется резким снижением Т-лимфоцитов на 20-40 дни и увеличением В-лимфоЦитов дс 30 дня.

Нами также установлено, что экспериментальное заражение животных клещамиЪ.очи вызывает снижение хелперной функции Т-системы на 5 и 20 дни исследования и активацию Т-супрессороЕ до конца исследований.

2.2.5. Изучение акарицадной эффективности препаратов при псороптозе овед

2.2-5.1. Остаточное акарицидное действие ивомека и его пролонгированных форм. Исследования по выявлению продолжительности остаточного акарицидного действия серийного ивомека производства Мерк Шарп и Домье /США/ и его"пролонгированных форм /ИК-1, ИК-2, ИК-3, ИП-1/, любезно представленных Институтом иммунологии Минздрава Российской Федерации, были выполнены в виварии Ставропольской НИЗС на овцах кавказской породы в гозрасте 10-12 месяцев в зимне-весенний период 1990-1991 гг. Для опытов было подобрано 30 овец /25 свободных от псо~ роптоза и 5 больных/. Диагноз подтвержден акарологически. Животных разделили на 6 групп /по 5 голов/ и забирковали.

Свец первой группы обработали серийным ивомеком подкожно в под-ло"ктевую складку в дозе 200 мкг/кг по д.в. Овцам второй, третьей и четвертой групп ввели соответственно препараты. ИК-1, Ж-2, ИП-1 в дозе 0,02 -мл/кг массы тела; овцам пятой группы также в подлоигевую складку, подкожно ввели препарат ИК-3 в дозе 0,03 мл/кг. Пролонгиро-1 ванные формы изомека и серийный ивомек вводили однократно. Овец, больных псороптозом /группа И 6/, обработке не подвергали., они служили источником инвазии. Животных всех шести групп поместили в одно помещение (где они находилась в постоянном контакте между собой.

В результате исследований было установлено, что животные первой группы, обработанные однократно ивомеком, заболели через 30 дней после начата эксперимента, овцы второй, третьей и пятой групп - через 23 дня, а"овцы четвертой группы, заболели через 36 дней. У заболевших овец появились первичные очаги поражения в области боков туловища, на спине и крестце. При клиническом осмотре на коже в местах поражения были видны папулы и везикулы, а во взятых соскобах находили на-кожниковых клещей.

Следовательно, при однократном применении ивомека остаточное акарицидное действие его составило не более 8-10 дней, препаратов- ИК-1, ИК-2 и ИК-3 - 3-5 дней, а у препарата ИП-1 - 13-15 дней.

Учитывая результаты проведенного экспериментамы сочли целесообразным сравнить остаточное акарицидное действие препарата ИП-1 и импортного ивомека при двукратном их применении. В опыт было взято 15,овец 2-х летнего возраста /10 свободных от дсороптоза и 5 .больных/. Овец разбили на 3 группы /по 5 в каждой/.- Овцам.первой группы ввели ивомек в дозе 1 мл на 50 кг массы тела, подкожно в подаюктевуа складку, двукратно с интервалом 7 дней. Овцам второй группы ввели

Щ-1 в дозе 0,02 мл на кг живой массы тела, также в подлоктевую складку, двукратно с интервалом 7 дней. Овец третьей группы, больных псороптозом, лечению не подвергали /контроль/. Подопытных и контрольных животных содержали в одном помещении, за ними проводили тслиничес-кие наблюдения и акарологические исследования.

Установлено, что овцы первой-группы, обработанные ивомеком, заболели на 47 день после введения препарата, а животные второй группы", обработанные препаратом ИП-1,- заболели через 57 дней. У овец появились незначительные очаги в области плеча и подгрудка. При клиническом осмотре и исследовании соскобов, взятых из очагов поражения, найдены живые и парализованные клещи ТЧого^е? оисх. У животных контрольной группы пеороптоз принял генерализованную форму.

Анализ полученных результатов показывает, что ьзомек при двукратном применении профилакткрует овец против заражения псоролозом в течение 24-26 дней; остаточное акарицидное действие препарата Щ-1 /также при двукратном применении/ составило 35-36 дней.

2.2.5.2. Акарицидная эффективность клеевой формы ивоыека. Клеевую форму ивомека нам предоставил Всероссийски]! научно-исследовательский и испытательный институт медицинской техники /ВНИИИМТ/.

Опыт проведен в весенний период на 15 спонтанно зараженных на-кожниковыми клещами овцематках 4-х летнего возраста. Животных раздел» ли на подопытную /10/ и контрольную /5 овец/ группы. Овец подопытной группы обработали препаратом подкожно в локтевую складку, однократно в дозе 0,3 мл на "50 кг массы тела. Контрольных овец лечению не подвергали и содержали раздельно.

Результаты систематически проводимых клинических обследований и микроскопии соскобов кожи свидетельствуют о высокой терапевтической эффективности данного препарата при псороптозе овец. Случаев рецедиво заболевает.. в.течение двух месяцев /срок наблюдения/ не отмечали;

Остаточное акарицидное действие клеевой формы ивомека определяли в опыте на 15 овцах, которых разделили на 3 группы: в первой и второй - овцы свободные от псороптоза, овцы третьей - сольные псороптозом /взяты из неблагополучной отары/. ""

Животных первой группы /й=5/ обработали клеевой формой, ивомека подкожно, однократно" в дозе 0,3 мл на 50 кг массы тела; овец второй групгш /й=5/ обработали серийным ивомеком производства Мерк Шарп и Домье, подкожно, однократно в подлоктевую складку в дозе.1 мл на 50 кг массы тела; третья группа /й=5/ лечению не подвергалась /контроль/ Овец 1-й, 2-й" и 3-й групп содержали в одном помещении, где они находились в постоянном контакте между собой. Кроме того, после введения

препаратов животным 1-й и груш непосредственно на кожу были под- сажены клещиРъ. во всех фазах развития. Учет результатов испы-

тания препаратов проводили путем клинического наблюдения за животными и акарологических исследований соскобов кожи.

Результаты проведенных исследований показали, что остаточное акарицидное действие клеевой формы ивомека с учетом инкубационного периода составило £0-23 дня, а серийного ивомека, также с учетом этого периода, всего 5-6 дней. Следовательно, однократное применение* клеевой Формы ивомека по персистентности соответствует двукратному применению серийного препарата "Ивомек".

2.2.5.3. Акарицидная эффективность ивомека пурон. Пурон - 0,5% раствор ивермектина на изопропилоеом спирте /фирмы МСД США/, рекомендован для обработки крупного рогатого скота методом поливания.

Эксперимент поставили на 10 овцах 4-х летнего возраста, спонтанно зараженных псороптозом. Животных разделили на 2 аналогичные группы по 5.голов в каждой. Первую группу обработали ивомеком пурон в дозе 1 мл на 10 кг массы тела, методом поливания, однократно на кожу спины /предварительно раздвинув штапель/ с помощью дозатора, входящего в комплект упаковки препарата. Вторую группу овец не лечили /контроль/. При наблюдении за подопытными овцами после обработки случаев токсикоза отмечено не било. Содержание овец подопытных и контрольных групп било раздельным.

При обследовании подопытных овец через 12, 19, 26, 32, 39 дней и дза месяца,рецидивов болезни не отмечали, что свидетельствует о высокой лечебной эффективности препарата и возможности применения его для борьбы с псороптозом овец.

2.2.5.4. Акарицидная эффективность препарата $ 41. Препарат.№41 нагл любезно предоставили сотрудники Всероссийского института гельминтологии имени Скрябина /БИГИС/..

В опыте было 15 овцематок из неблагополучной по псороптозу отару. Диагноз подтвержден акарологически.

Животным первой группы /й=5/ ввели препарат в дозе 2 мл, овцам второй группы /й=5/ - 3 мл на 50 кг массы тела, подкожно в подлокте-вую складку. Овец первой и второй групп содержали вместе, третью группу пе лечили /контроль/ и содержали отдельно.

Наблюдение за животными и их обследование проводили з течение 20 дней. Улучшения клинического состояния у ов.ец за. этот период не наступало; болезнь прогрессировала, также как и у овец контрольной группы.

2.2.5.5. Акарицидная эффективность аверсекта. Новый отечественный акарицид аверсект /аналог ивомека/ был предложен НПО "Фармбиомед" и Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии, гигиены и экологии /ВНИИВСГиЭ/.

Опыт проведен на 20 овцах, пораженных псороптозом.

Овец разделили на 4 группы по 5 голов в каждой. Овцам первой группы ввели подкожно аверсект в дозе 1,5 мл на 50 кг живой массы в подлоктевую складку, однократно. Овцам второй группы - аверсект в той же дозе, но двукратно, с интервалом в 10 дней. Овцам третьей группы - ивомек в дозе 1 мл на 50 кг массы тела, двукратно," с интервалом 10 дней. Овцы четвертой группы служили контролем. Животных всех груш содержали раздельно в прикошарно-базовом режиме.

Учет результатов терапевтической эффективности препаратов проводили путем клинических наблюдений за"животными и исследований соско-Оов кожи через 1, 2, 3, 6, 10, 17, 23, 30, 37, 43, 50, 66 дней после обработки. "

Анализ результатов акарологйческих исследований и клинических наблюдений с 6-го по 66 день показал, что животные подопытных групп были клинически здоровы. У животных контрольной группы отмечали усиление развития болезненного процесса.

Остаточное акариг.идное действие аверсекта при псороптозе овец. С целью выяснения вопроса оо остаточном акарицидном действии аверсекта при псороптозе овец проведен опыт яа 15 овцах /10 - свободных от лсороптоза к 5 болышх/, которых разделили на 3 группы /по 5 гол./.

Овнам первой группы подкожно ввели аверсект одно?д?атно, в подлоктевую складку в дозе 1,5 мл на 50 кг массы ачла. Овец второй группы обработали серийным", ив оме ком полкото, двукратно с интервалом в 7 дней, по мл на 50 кг массы тела. Овец третьей группы не обрабатывал^ они служили контролем лечебной эффективности препаратов и источником инвазии при совместном содержании с овцами подопытных групп

Учет результатов опыта и оценку остаточного акарицидного дей-лаш испытуемы- препаратов устанавливали по результатам клинического обследования животных и микроскопического исследования соокобов кожи с промежутками в 5-7 дней до начала псороптогного процесса у животных первой & второй групп.

Данные проведенных исследований, которые продолжались до клинического проявления болезни у овец подопытных групп, ползали, что аверсект /серия от 24.08.92/, примененный однократно в дозе 1,5 т. на 50 кг массы животного, обеспечивает остаточное акарицидное действие на протяжении 40-44 дней, а изомек на 22-24 дня.

2.2.5.6. Акар.гцидная эффективность препаратов■ И-1, И-2. Препараты И-1, И-2, полученные из Института иммунологии Минздрава Российской Федерации, содержат в качестве д.в. ивермектин и вспомогательные вещества,"усиливающие, по мнению авторов, акариционое действие

и стабильность препаративной формы.

Для проведения опыта из неблагополучной по псороптозу отары были 0T06pe_i. больные овцематки в количестве 39; диагноз подтвержден акарологически. Из них сформировали 3 группы. Овец первой группы /13 голов/ обработали препаратом И-1 подкожно в подлокгевую складку, однократно в дозе 1 мл на 50 кг массы тела. Овец второй подопытной груипы /16 голов/ обработали препаратом И-2 подкожно, однократно и в той же дозе, что и первая" группа. Овцы третье«! группы /10 голов/ лечению ив подвергались, служили контролем, Зйнзотных подопытных и контрольной групп содержали раздельно в прикошарно-базово<л режиме.

На 5-7 сутки после инъекций препаратов у овец в соскобах обнаруживали только мертвых клещей. Наблюдения и исследования продолжались в течение ЗБ дней. Животные были излечены от псороптоза, случаев рецидивов заболевания не выявлено.

2.2.5.7. Акарицидная эффективность саркопцвдина. Саркопцидин -акарвдидннй препарат микробиологического синтеза, изготовлен на основе культуры актиномицета St^eplowyees sp штамм № 15, предоставлен Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной энтомологии и арахнологии /ВНЖВйА/.

Акарицидность саркопцвдина изучали на 14 овцематках с выраженными клиническими признаками псороптоза. Овец разделили на две группы и содержали раздельно.

Одну группу животных /9 голов/ обработали 2%-пой водной суспензией препарата путем втирания в пораженные участки кожи, двукратно с интервалом в 7 дней; вторую группу овец /контроль - 5 голов/ обработали водопроводной водой, на которой готовили суспензию саркопци-дина. В среднем ча каждую овцу израсходовали от 100 до 150 ш суспензии саркопцидина. Как после первой, так и после второй обработки признаков- токсикоза л видимых отклонений от физиологической нормы у овец не отмечали. В соскобах кожи в течение 7 дней обнаруживали живых и единицы мертвых накожников. После повторной обработки и до окончания опыта /2 месяца/ живых клещэй h. oi/i-s не обнаруживали.

У контрольных животных в течение этого сррКа болезнь прогрессировала.

2.2.5.8. Производственные испытания. Результаты исследований

по изучению акарицидных свойств препаратов показали, что в числе испытанных наибольшей эффективностью, по сравнению с импортным ивомеком, обладают клеевая форма ивомека, саркопцидин, аверсект к препарат ИП-1. Это позволяет нам рекомендовать их для производственных испытаний. Однако, из-за отсутствия достаточных количеств, нам удалось испытать в проивводстве только аверсект и клеевую форму ивомека.

Испытание клеевой Форш ивомека. В ОПХ "Темнолесский" обработали отару овец кавказской породы в количестве 280 голов, в которой 45-50? животных имели "клинические признаки псороптоза /облысение, свисание руна в области предплечий, туловища и корня хвоста, -расчесы/. Диагноз был подтвержден акарологически. "

„ Учет эффективности проводили через каждые 6-10 дней после введения препарата в течение двух месяцев. Окончательный учет результатов-терапевтического действия клеевой форш ивомека был получен по итогам прошедшей зимовки.

Установлено, что после однократного подкожного применения клеевой формы ивомека /0,3 мл на 50 кг массы тела животного/, достигнут высокий терапевтический ■эффект /ЭЭ=100#/. Случаев рецидивов заболевания в отаре не было на протяжении всего стойлового периода.

Испытание аверсекта. Опыт провели в ОПХ "Темнолесский" на" отаре /700 голов/ овец, пораженных ггсороптозом. Диагноз подтвержден акарологически. После подкожного применения аверсекта обследование овец проводили через 1СК15 дней в течение двух месяцев. Установлено, что препарат /серия от 24.08.92/, примененный однократно в дозе 1,5 мл на 50 кг массы животногоявляется эффективным при псороптозе. У овец на 4-5 де?^ после инъекции аверсекта прекратился зуд, псороптозные очаги очистились от струпьев и корок на 20-30 дни и начали обрастать новой шерстью.

По результатам проведенного опыта можно сделать вывод, что терапевтическая эффективность аверсект? была достигнута после однократного его применения /срок наблюдения - 61 день/.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ результатов исследований по оценке Т- и В-лкмфоцитов показал, что в механизме иммунного ответа при эксперимент-дьном псоропто: участвуют как клеточные, так и гуморальные механизмы иммунитета. При этом следует отметить, что уже в первые дни болезни включаются как Т-, так ж В-лимфоциты. Однако, при расшифровке динамики Т-лимфоцитов на субклеточном уровне, то есть при определении Т-хелперов /теофиллш резистентные лимфоциты / и Т-супрвссоров /теофиллинчувствительные

лимфоциты/, ь первые дни болезни мы не отмечали резкого дисбаланса в отношении Т-лимфоцитов, несущих регулятсрнне функции, что указывает на отсутствие глубоких иммунологических нарушений в звене Т-кле-точной регуляции.

Не имея литературных данных по изучаемому вопросу, нам хотелось высказать предположение, что характер выявленных сдвигов показателей иммунологического гомеостаза носит защитный характер, так как наблюдается активация, защитных реакций в виде изменения функционального состояния рецепторного аппарата. Иммунологические реакции включаются еще в начальной стадии болезни и связаны с развитием патологического процесса не только в коже, но и во всем организме овец. Считаем, что исследования в этом направлении необходимо продолжить.

Изыскание и испытание акарицидных препаратов биологического синтеза показало перспективность широкого применения клеевой формы ивомека, аверсекта, саркопцидина, препаратов ИП-1, И-1 и И-2, как более эффективных и экологически безопасных для борьбы с псороптозом овец.

1. Характер и выраженность иылунного ответа у овец, больных псороптозом," определяется циклом развития накожниковых клещей.

В иммунный ответ вовлечены как клеточные-, так и гуморальные механизмы. -

2. При экспериментальном псороптозе установлена активация Т-лимфоцитов в ранний период болезни с последующей супрессией, обусловленной нарушением количественного состава их рёгулятерных субпо-луляцш.

3. Гуморальный иммунный ответ при псороптозе характеризуется активацией В-лимфоцитов с 20 по 40 день /предел наблюдений/ после заражения накожниковыми клещами.

4. "Высокоэффективным акарицидным действием при псороптозе овец обладают: аверсект - 1,5 мл на 50 кг массы животного при однократном подкожном применении; сатаошидия - мзтодом двукратного орошения или втирания в пораженные участки кожи 2%-ной водной суспензии; клеевая форма ивомека - 0,3 мл на 50 кг массы животного -при однократном подкожном применении; ИП-1. К-1. И-2 - 1 мл на 50 кг "массы животного, подкожно, однократно; ивомек пурон - 1 мл на 10 кг массы тела животного, методом поливания вдоль позвоночного столба.

5. Препараты ИК-1, ИК-2, Ж-3 и № 41, обладая слабой акарицвд-1 ностью, не обеспечивают ни лечебной, ни профилактической эффективности противопсороптозной обработки овец.

Практические предложения

Результаты наших исследований вошли в следующие нормативные документы:

1. Временное наставление по применении биологического акарици-да саркопцидин для лечения сельскохозяйственных животных и пушных зверей при саркоптоидозах. Утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 22.10.1990 г.

2. Временное наставление по применению аверсекта при лсоропто-зе крупного рогатого скота и овец."Утверждено Главьым управлением ветеринарии МСХ РФ 11 декабря 1992 г.

1. Вишняков Г.В., ЭДективность саркопцидина при псороптозе овец // Ветеринария. - 1993. - № 5. - С. 35.

2. Вишняков Г.В., Иммунобнологическая реактивность овец при псороптозе // Доклада Российской академии сельскохозяйственных наук. - 1993. - № 3. - С. 69-72.

3. Ремез В.И., Жаров В.Г., Башкатэв Г.А., Прохорова З.Г., Вишняков Г.В. Профилактика и меры борьбы с основными арахдо-энто-мозами от зц в Ставропольском крае // Рекомендации. - Ставрополе, 1990.. - 21 с. .

4. Вишняков Г.В., Водянов A.A., Акарицидная эффективность аверсекта при псороптозе овец. - Сб. науч. тр. / Ставрои. СХИ. -Ставрополь, 1994. - С. 13-14.

/57 I.-"CCokj /7*

​ t-критерий Стьюдента – общее название для класса методов статистической проверки гипотез (статистических критериев), основанных на распределении Стьюдента. Наиболее частые случаи применения t-критерия связаны с проверкой равенства средних значений в двух выборках.

1. История разработки t-критерия

Данный критерий был разработан Уильямом Госсетом для оценки качества пива в компании Гиннесс. В связи с обязательствами перед компанией по неразглашению коммерческой тайны, статья Госсета вышла в 1908 году в журнале «Биометрика» под псевдонимом «Student» (Студент).

2. Для чего используется t-критерий Стьюдента?

t-критерий Стьюдента используется для определения статистической значимости различий средних величин. Может применяться как в случаях сравнения независимых выборок (например, группы больных сахарным диабетом и группы здоровых ), так и при сравнении связанных совокупностей (например, средняя частота пульса у одних и тех же пациентов до и после приема антиаритмического препарата ).

3. В каких случаях можно использовать t-критерий Стьюдента?

Для применения t-критерия Стьюдента необходимо, чтобы исходные данные имели нормальное распределение . В случае применения двухвыборочного критерия для независимых выборок также необходимо соблюдение условия равенства (гомоскедастичности) дисперсий .

При несоблюдении этих условий при сравнении выборочных средних должны использоваться аналогичные методы непараметрической статистики , среди которых наиболее известными являются U-критерий Манна - Уитни (в качестве двухвыборочного критерия для независимых выборок), а также критерий знаков и критерий Вилкоксона (используются в случаях зависимых выборок).

4. Как рассчитать t-критерий Стьюдента?

Для сравнения средних величин t-критерий Стьюдента рассчитывается по следующей формуле:

где М 1 - средняя арифметическая первой сравниваемой совокупности (группы), М 2 - средняя арифметическая второй сравниваемой совокупности (группы), m 1 - средняя ошибка первой средней арифметической, m 2 - средняя ошибка второй средней арифметической.

5. Как интерпретировать значение t-критерия Стьюдента?

Полученное значение t-критерия Стьюдента необходимо правильно интерпретировать. Для этого нам необходимо знать количество исследуемых в каждой группе (n 1 и n 2). Находим число степеней свободы f по следующей формуле:

f = (n 1 + n 2) - 2

После этого определяем критическое значение t-критерия Стьюдента для требуемого уровня значимости (например, p=0,05) и при данном числе степеней свободы f по таблице (см. ниже ).

Сравниваем критическое и рассчитанное значения критерия:

• Если рассчитанное значение t-критерия Стьюдента равно или больше критического, найденного по таблице, делаем вывод о статистической значимости различий между сравниваемыми величинами.
• Если значение рассчитанного t-критерия Стьюдента меньше табличного, значит различия сравниваемых величин статистически не значимы.

6. Пример расчета t-критерия Стьюдента

Для изучения эффективности нового препарата железа были выбраны две группы пациентов с анемией. В первой группе пациенты в течение двух недель получали новый препарат, а во второй группе - получали плацебо. После этого было проведено измерение уровня гемоглобина в периферической крови. В первой группе средний уровень гемоглобина составил 115,4±1,2 г/л, а во второй - 103,7±2,3 г/л (данные представлены в формате M±m ), сравниваемые совокупности имеют нормальное распределение. При этом численность первой группы составила 34, а второй - 40 пациентов. Необходимо сделать вывод о статистической значимости полученных различий и эффективности нового препарата железа.

Решение: Для оценки значимости различий используем t-критерий Стьюдента, рассчитываемый как разность средних значений, поделенная на сумму квадратов ошибок:

После выполнения расчетов, значение t-критерия оказалось равным 4,51. Находим число степеней свободы как (34 + 40) - 2 = 72. Сравниваем полученное значение t-критерия Стьюдента 4,51 с критическим при р=0,05 значением, указанным в таблице: 1,993. Так как рассчитанное значение критерия больше критического, делаем вывод о том, что наблюдаемые различия статистически значимы (уровень значимости р<0,05).

С помощью метода «спонтанных» розеток (розеткообразование с эритроцитами барана) определяют количество Т-лимфоцитов в крови. Обязательным является расчет абсолютного количества розеткообразующих лимфоцитов в 1 мкл крови. Вычисление только их процента среди всех лим-фоцитов может привести к ошибке. Например, в норме среди лимфоцитов крови содержится 60% Т-клеток, а при В-лейкозах Т-лимфоцитов в крови

может быть около 1%, но это не значит, что имеется 60-кратное угнетение Т-системы иммунитета. Если общее количество лимфоцитов у данного больного в 60 раз больше, чем у здорового человека, то абсолютное число Т-лимфоцитов в его крови нормально.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов под влиянием ФГА или в микст-культуре. Эту и предыдущую пробу необходимо проводить параллельно, поскольку при некоторых иммунодефицитах угнетение реакции бласттрансформации свидетельствует не о снижении уровня Т-лимфоцитов в крови, а об угнетении их функциональной активности. Например, при иммунодефиците с атаксией - телеангиэктазией регистрируется почти полное угнетение бласттрансформации при нормальном количестве Т-розеток среди лимфоцитов. До разработки метода «спонтанных» розеток угнетение бласттрансформации расценивали как показатель снижения
количества Т-лимфоцитов в крови.

Определение динамики бласттрансформации. Эту реакцию необходимо учитывать не в один какой-либо срок культивирования лимфоцитов, а в динамике с использованием разных доз митогена. Кривые зависимости время - эффект и доза - эффект лучше всего отражают данный вид функции-ональной активности лимфоцитов. Наиболее объективный учет бласттранс-формации во всех случаях требует применения радиоизотопной методики с определением включения меченых нуклеотидов в клетки. Оценка продукции лимфоцитами периферической крови гуморальных медиаторов клеточного иммунитета. Наиболее распространен тест подавления миграции макрофагов фактором, угнетающим их миграцию, выделяемым сенсибилизированными лимфоцитами под влиянием соответствующего антигена. С помощью этого метода можно установить сенсибилизацию организма к тому или иному антигену.

Постановка кожных реакций гиперчувствительности замедленного типа на широко распространенные антигены (туберкулин, трихофитии и др.). Конечно, негативные реакции не могут служить доказательством неполно­ценности Т-системы иммунитета, так как организм может быть не сенсиби-лизирован к используемым препаратам. Контактная аллергия к динитро-хлорбензолу (ДНХБ). Этот гаптен при накожной аппликации вызывает развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа. Повторное нанесение препарата дает типичную кожную реакцию. Поскольку вероят-ность контакта индивидуума с данным редким химическим соединением ничтожна, проба с ДНХБ служит весьма распространенным методом оценки способности организма развивать гиперчувствительность замедленного типа, т. е. функциональной активности Т- системы иммунитета.

Отторжение аллогенного кожного лоскута. Эта реакция также относится к гиперчувствительности замедленного типа и осуществляется в основном Т-лимфоцитами. Однако трансплантация чужеродной ткани приводит к сенсибилизированности организма по отношению к трансплантационным анти-генам, что может оказаться нежела­тельным при последующем лечении больного такими методами, как пересадка костного мозга, вилочковой железы и др.

Биопсия лимфатических узлов и гистологическая оценка тимусзависимых областей и вилочковой железы. Эти тесты ставятся в сложных для диагностики случаях при подозрениях на комбинированные иммунодефициты и злокачественные новообразования.

В 1981 г. Всемирная организация здравоохранения опубликовала Меморан-дум по правильному и неправильному применению широко используемых методов клинической иммунологии. Этот документ, составленный группой авторитетных клинических иммунологов, характеризует особенности показаний к применению наиболее часто используемых тестов. В документе выделяется два уровня значимости исследования - абсолютная необхо-димость и полезность. Анализируется 8 иммунологических тестов.

1. Количественная оценка иммуноглобулинов в сыворотке крови абсолютно необходима при подозрении на наличие первичного или вторичного иммуно-дефицита, а также для слежения за течением заболеваний при гамма-глобу-линотерапии. Количественная оценка сывороточных иммуноглобулинов полезна для отличия «доброкачественных» идиопатических моноклональных гаммапатий от миеломы. Определение уровня IgМ в пуповинной крови ново­рожденных полезно при подозрении на врожденную инфекцию.

2. Иммуноэлектрофоретический анализ иммуноглобулинов в биологических жидкостях абсолютно необходим при подозрении на наличие следующих болезней: миелома, макроглобулинемия Вальденстрема, болезни тяжелых цепей, амилоидоз, болезни, связанные с отложением иммуноглобулинов в тканях. Этот анализ также необходим при таких аномалиях, как наличие криоглобулинов, протеинурии типа Бенс- Джонса, повышенной вязкости сыворотки. Иммуноэлектрофорез полезен при некоторых им-мунопролиферативных заболеваниях.

3. Оценка уровня общего IgЕ абсолютно необходима только в одном редком случае (гипер-IgЕ-синдром, ассоциированный с эозинофилией и рецидиви-рующими инфекциями), но может быть полезна при дифференциации между IgЕ- и не IgЕ-опосредуемыми нарушениями, которые клинически неразличи-мы (риниты, бронхиальная астма, дерматиты и сыпи, пищевая неперено-симость). Измерение количества специфического IgЕ не является абсолютно необходимым ни при какой патологии. Этот тест не может полностью заменить аллергологический анамнез и кожные пробы. Оценка уровня специфического IgЕ полезна при тяжелых дерматитах или дермографизме, в случаях, когда терапия приводит к изменению кожных реакций, при очень сильных кожных реакциях и т. п.

4. Определение комплемента по тотальному тесту 50 % гемолитической активности является необходимым только при подозрении на генетически обусловленные дефекты в системе комплемента. Оценка по этому тесту или путем определения С3 и С4 компонентов комплемента полезна для слежения за течением болезни и эффективностью терапии при гломерулонефрите, при таких иммунокомплексных болезнях, как системная эритематозная волчанка, и некоторых формах васкулитов, а также при геморрагической лихорадке Денге.

5. Определение иммунных комплексов в биологических жидкостях не является абсолютно необходимым ни в каких клинических ситуациях. Их присутствие в сыворотке крови неспецифично для болезней иммунных комплексов. Повреждения тканей, индуцированные иммунными компексами, могут развиваться без определимых количеств циркулирующих в крови комплексов. Наоборот, присутствие комплексов в крови может не сопрово-ждаться наличием тканевых повреждений. Более ценным является прямой анализ проб тканей. Оценка иммунных комплексов может быть полезной для определения активности процесса при таких болезнях, как ревматоидный артрит и системная красная волчанка, и при контроле за эффективностью обменных переливаний плазмы и для прогноза течения таких опухолевых процессов, как острый лейкоз.

6. Определение аутоантител путем непрямой иммунофлюоресценции абсолютно необходимо как тест на наличие антиядерных антител при диагностике системной красной волчанки. Обнаружение антиядерных антител полезно для диагностики так называемых смешанных болезней соединительной ткани, хронического активного гепатита и прогрессивного системного склероза. Тест на тиреоидные аутоантитела необходим для диагностики хронического тиреоидита и микседемы взрослых. Определение других аутоантител методом непрямой иммунофлюоресценции полезно в конкретных нечастых случаях.

7. Определение количества В- и Т-клеток абсолютно необходимо для диагностики и слежения за течением первичных иммунодефицитов, а также для классификации лимфопролиферативных заболеваний. При этом желательно использовать одновременно несколько реагентов, например моноспецифические антииммуноглобулиновые антитела и моноклональные антитела против лимфоидных популяций. Изучение субпопуляций Т- и В-лимфоцитов полезно у отдельных пациентов.

8. Оценка ответа лимфоцитов на митогены как показатель клеточно - опосре-дованного иммунитета не может быть рекомендована как каждодневный (рутинный) метод. Его следует использовать только выборочно. Показатель единичного измерения, даже если он далеко выходит за пределы нормы, имеет очень малую клиническую ценность и не обязательно свидетельствует о нарушении клеточно-опосредованного иммунитета. Оценка этой формы иммунитета абсолютно необходима в случаях предполагаемого или дока-занного первичного иммунодефицита. Оценка клеточного иммунитета поле-зна для исследования вторичных иммунодефицитов, включая те, которые связаны с хроническими инфекциями, и для контроля за применением иммуностимулирующей терапии.

Количественная оценка

Определение количества Т-лимфоцитов ( CD 3+) методом иммунных розеток в готовых препаратах

Принцип метода: На 1 этапе методом центрифугирования в градиенте плотности из крови выделяют лимфоциты. На 2 этапе с помощью реакции розеткообразования с эритроцитами барана определяют процент Т-лимфоцитов от общего числа лимфоцитов. Реакция розеткообразования основана на наличии на поверхности Т-лимфоцитов рецепторов, способных фиксировать эритроциты барана. При добавлении к суспензии лимфоцитов эритроцитов барана, последние адсорбируются Т-лимфоцитами, а образующиеся при этом структуры называются розетками. Общее количество лимфоцитов подсчитывают под микроскопом по количеству розеток.

Качественная (функциональная) оценка

1. Оценка способности к пролиферации в реакции бластной трансформации лимфоцитов

Принцип метода: Т-лимфоциты под воздействием некоторых биостимуляторов, например, фитогемагглютинина (ФГА) в культуре in vitro способны превращаться в большие бластоподобные клетки с разрыхленным ядром и базофильной цитоплазмой, активно синтезирующие ДНК.

2. Определение количества т-супрессоров, т-хелперов и т-киллеров в реакции иммунофлюоресценции (риф)

Принцип метода: Лимфоцитарная взвесь обрабатывается моноклональными антителами против CD-маркеров отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов, а затем меченой флюорохромом антиглобулиновой сывороткой. Подсчет флюоресцирующих клеток проводят под люминесцентным микроскопом (двухэтапная РИФ).

Иммунологический статус Тесты первого уровня

	Тест	Показатель
	Число лейкоцитов; лейкоформула	Общее число лейкоцитов	4,5-9,5 тыс/мкл
		Нейтрофилы
		Лимфоциты	18-38% (1250-2500 в 1 мкл)
		Моноциты
		Базофилы
		Эозинофилы
	Т- и В-лимфоциты	Т-лимфоциты
		Т-лимфоциты абс.	1000-2000 в 1 мкл
		В-лимфоциты
		В-лимфоциты абс.	100-300 в 1 мкл
	Уровень Ig в сыворотке крови
			10,0-20,0 г/л
	Фагоцитарная активность лейкоцитов крови (показатели фагоцитоза)	Фагоцитарный индекс	Для кандиды 1-2,5 Для стафилококка 4-9
		Фагоцитарное число	Для кандиды 40-90 Для стафилококка 40-80

Источник информации: О.К. Поздеев «Медицинская микробиология» под редакцией акад. РАМН В.И. Покровского (Москва, 2001)

Тесты второго уровня (аналитические)

Определение субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперы, Т-супрессоры, Т-киллеры).

Оценка пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов (реакция бласттрансформации).

Определение спонтанной миграции лейкоцитов и тест торможения миграции лейкоцитов.

Определение лимфоцитов, несущих поверхностные иммуноглобулины различных классов (В-лимфоцитов).

Определение медиаторов иммунной системы.

Кожные тесты гиперчувствительности замедленного типа.

ЗАНЯТИЕ № 16

ТЕМА: ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ ПО РАЗДЕЛАМ «ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРИКЛАДНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ»

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

Микрофлора тела человека. Нормальная (резидентная) микрофлора человека. Формирование и развитие нормальной микрофлоры. Функции нормальной микрофлоры.

Дисмикробиоценоз (дисбактериоз), причины, виды, принципы коррекции.

Понятие об инфекции. Определение, общая характеристика. Отличия инфекционных болезней от неинфекционных.

Роль микроорганизма в инфекционном процессе. Инфицирующая доза. Способы заражения. Входные ворота. Патогенность и вирулентность. Генетический контроль патогенности и вирулентности. Факторы, повышающие и снижающие вирулентность микробов.

Факторы патогенности. Методы определения вирулентности, единицы. Облигатно-патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.

Токсичность и токсигенность микроорганизмов. Эндотоксины, свойства, получение, применение. Экзотоксины, свойства, получение, единицы измерения. Типы экзотоксинов, механизм действия.

Роль макроорганизма в развитии и течении инфекционных болезней. Наследственные факторы. Анатомо-физиологическое состояние организма. Роль условий жизни в развитии и течении инфекционных болезней.

Динамика инфекционного процесса, его особенности.

Биологический метод исследования, этапы, оценка. Лабораторные животные. Способы заражения.

Факторы и механизмы неспецифической резистентности. барьерные и противомикробные свойства кожи, слизистых оболочек, лимфатических узлов, ареактивность тканей, нормальная микрофлора.

Гуморальные факторы неспецифической защиты: эндогенные пептиды-антибиотики, пропердин, лизоцим, b-лизины, фибронектин, белки острой фазы воспаления.

Интерфероны. Группы интерферонов по продуцентам, типы ИФН по способу образования. Механизм действия интерферонов.

Система комплемента. Структура. Пути активации (классический, альтернативный). Активаторы системы комплемента. Ингибиторы и инактиваторы комплементарного каскада. Биологические функции активированных компанентов комплемента. Анафилатоксины, их биологическая роль. Мембраноатакующий комплекс. Методы определения активности системы комплемента.

Полиморфноядерные и мононуклеарные фагоциты (происхождение, характеристика, функции). Фагоцитарная реакция (фазы, механизмы и факторы внутриклеточной бактерицидности). Исходы фагоцитоза.

Показатели фагоцитоза и методы их определения.

Естественные киллеры. Механизмы распознавания и цитолиза клетки-мишени.

Антигены: определение, принцип строения, свойства антигенов. Классификации антигенов. Групповые, видовые, вариантные, стадийные антигены. Перекрестные антигены. Антигенная мимикрия. Антигены бактерий. Антигенные свойства грибов.

В-лимфоциты: развитие, маркеры. В-клеточный рецептор: структура (константные и вариабельные участки, полипептидные цепи). Механизмы В-клеточной активации. Функция В-лимфоцитов.

Антитела. Структура молекулы иммуноглобулинов: вариабельные и константные области, расположение и структура доменов. Антигенсвязывающие участки.

Антителогенез, динамика синтеза антител. Поликлональные и моноклональные антитела

Классы и субклассы иммуноглобулинов, изотипы, аллотипы, идиотипы. Биологические свойства иммуноглобулинов

Механизм взаимодействия антител с антигенами. Валентность, аффинность и авидность антител. Перекрестные реакции. Полные и неполные антитела. Иммунные комплексы.

Биологические эффекты взаимодействия антител с антигенами: активация комплемента, нейтрализация токсинов и вирусов, лизис, агглютинация и опсонизация микроорганизмов, торможение адгезии, инвазии, подавления фагоцитарной реакции.

Прямая и непрямая реакция Кумбса. Простая радиальная иммунодиффузия в агаре по Манчини.

Т-лимфоциты: развитие, маркеры. Субпопуляции Т-лимфоцитов (Т-хелперы нулевые, Т-хелперы 1, 2 типов, Т-регуляторы; Т-эффекторы: цитотоксические Т-лимфоциты, Т-лимфоциты памяти).

Т-клеточный рецептор: строение, типы, генетический контроль, разнообразие. Роль Т-клеточного рецептора. Т-зависимые антигены.

Клеточный иммунный ответ, динамика развития, мишени действия Т-килеров, проявления.

Серологический метод исследования: задачи, этапы, оценка. Общая классификация иммунологических методов диагностики: серотипирование, серодиагностика

Диагностикумы. Диагностические иммунные сыворотки. Методы их получения. Поливалентные, монорецепторные адсорбированные (поликлональные) и моноклональные диагностические сыворотки и тест-системы.

Качественная и количественная оценка серологических реакций: титр иммунных сывороток, диагностический титр, нарастание титра антител, аффинность и авидность антител.

Механизмы течения и проявления реакций агглютинации. Нагрузочные реакции агглютинации: постановка и учет реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), латекс-агглютинации. Реакция ко-агглютинации. Оценка результатов.

Реакции иммунопреципитации: варианты постановки. (кольцепреципитация по Асколи, двойная диффузия в агаре, иммуноэлектрофорез), методы учета и оценки.

Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой.

Реакции иммунного лизиса и связывания комплемента: методика постановки, учета и оценки, применение в диагностике инфекционных заболеваний.

Реакции иммунофлюоресценции. Диагностическое значение, информативность, варианты постановки реакций: прямой и непрямой.

Иммуноферментный анализ. Варианты постановки. Возможные ошибки и ограничения метода, иммуноферментного анализа.

Иммуноблотинг (вестерн-блотинг). Проведение и учет результатов. Варианты применения метода.

Радиоиммунный анализ, сущность, способы постановки, методы учета и оценки реакций, достоинства и недостатки метода.

Аллергия, определение, стадии аллергии. Аллергены. Бытовые, пыльцевые, эпидермальные, пищевые, химические, лекарственные, микробные экзоаллергены. Пути проникновения аллергенов в организм. Эндоаллергены.

Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ). Медиаторный тип ГНТ (I). Анафилактический шок, механизм развития. Атопии, механизм развития, клинические формы. Цитотоксический тип ГНТ (II). Иммунокомплексный тип ГНТ (III).

Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ, IV). Контактная аллергия. Инфекционная аллергия.

Методы диагностики аллергических болезней. Кожные пробы. Провокационные тесты. Элиминационные тесты. Методы аллергодиагностики in vitro – определение антигенспецифических и антигеннеспецифических IgЕ.

Общие принципы специфической и неспецифической профилактики и терапии аллергических заболеваний. Проведение специфической аллерговакцинации. Профилактика аллергических заболеваний на производстве, в быту, при оказании медицинской помощи

Пассивная иммунопрофилактика. Определение. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Типы и способы получения. Показатели активности. Показания к применению.

Иммунотерапия. Определение. Препараты для иммунотерапии. Механизм действия. Показания к применению. Осложнения иммунопрофилактики и иммунотерапии.

Иммунный статус организма. Популяционные и возрастные особенности иммунного статуса. Показатели и методы определения и оценки.

Иммунограмма. Показания к назначению иммунограммы. Основные правила интерпретации иммунограмм. Принципы постановки иммунологического диагноза.

Иммунодефициты: наследственные и приобретенные. Клинические синдромы.

Аутоиммунные болезни. Механизмы развития. Клинические формы. Аутоантигены.

Противоопухолевый иммунитет. Концепция иммунного надзора. Характеристика антигенов опухолей. Механизм элиминации опухолевых клеток под действием цитотоксических лимфоцитов и естественных киллеров. Гуморальный тип иммунного ответа на опухолевые антигены, роль в противоопухолевом иммунитете. Механизмы ускользания опухолей от иммунного надзора.

Трансплантационный иммунитет. Типы трансплантатов. Трансплантационные антигены. Условия развития реакции иммунного отторжения трансплантата и его механизмы. Способы подавления трансплантационной реакции Осложнения.

Аналитическое заключение по результатам оценки иммунного статуса. Соответствие с другими лабораторными тестами.

Особенности изменений иммунного статуса при различных иммунопатологических состояниях: первичных и вторичных иммунодефицитах, органоспецифических и органонеспецифических аутоиммунных заболеваниях, аллергических заболеваниях, опухолях.